GB/T 18980-2003

📋 Scope / 适用范围 ai_extracted

本标准适用于乳、乳粉，以及低脂乳、脱脂乳、低脂乳粉和脱脂乳粉中黄曲霉毒素M，含量的测定。 乳粉中的最低检测限是0. 08 ug/kg，乳中的最低检测限是0. 008 fcg/I_ 1.2 术语和定义 下列术语和定义适用于本标准。 1．2.1 黄曲霉毒素M,含贵 aflatoxin M, content 通过本标准所测定出的本物质的质量含量。 注：黄曲霉毒素Ml的含量以微克／升（I ,g/I）或微克／千克(Wg/kg）表示。 1.3 原理 试样通过免疫亲和柱时，黄曲霉毒素M,被提取。亲和柱内含有的黄曲霉毒素M，特异性单克隆 抗体交联在固体支持物上，当样品通过亲和柱时，抗体选择性的与黄曲霉毒素M,（抗原）键合，形成抗 体一抗原复合体。用水洗柱除去柱内杂质，然后用洗脱剂洗脱吸附在柱上的黄曲霉毒素M,，收集洗脱 液。用带有荧光检测器的高效液相色谱仪测定洗脱液中黄曲霉毒素M，含量。 1．4 试剂 除非特别声明，所用试剂为分析纯；使用蒸馏水、去离子水或其他相当纯度的水。 1.4.1 免疫亲和柱：应该含有黄曲霉毒素M,的抗体。亲和柱的最大容量不小于100 ng黄曲霉毒素 M,（相当于50 mL浓度为2 fc g/L的试样），当标准溶液含有4 ng黄曲霉毒素M,（相当于50 mL浓度为 80 ng/I的试样）时回收率不低于80 。应该定期检查亲和柱的柱效和回收率，对于每个批次的亲和柱 至少检查一次（见1.4. 1.1和1.4.1.2)0 1.4. 1. 1 柱效检查 用移液管(1.5.4)移取l. 0 ml的黄曲霉毒素M，储备液（ (1.4.5.2)到20 mL的锥形试管中 (1. 5. 9)。用恒流的氮气（ (1. 4. 3)将液体慢慢吹干，然后用10 ml, 10％的乙睛(1.4.2.2)溶解残渣，用力 摇荡。 将该溶液加人到40 mI，的水中，充分混匀，全部通过免疫亲和柱。按说明书要求使用免疫亲和柱。 淋洗免疫亲和柱后，洗脱下黄曲霉毒素M,。将洗脱液进行适当稀释后，用高效液相色谱仪测定免疫亲 和柱键合的黄曲霉毒素M，含量。 计算黄曲霉毒素M；的回收率，将其结果与1. 4. 1中所要求的指标进行比较。 1. 4. 1.2 回收率检查 用移液管(1. 5. 4)移取0. 8 ml, 0. 005 fcg/ml的黄曲霉毒素M，标准工作液（ (1.4.5.3)到10 ml，的 水中，充分混匀，全部通过免疫亲和柱。按说明书使用免疫亲和柱。淋洗免疫亲和柱，洗脱下黄曲霉毒 素M,。将洗脱液进行适当稀释后，用高效液相色谱仪测定免疫亲和柱键合的黄曲霉毒素M,含量。计 GB/T 18980-2003 算黄曲霉毒素M,的回收率，将其结果与1.4.1中所要求的指标进行对比。 1.4.2 乙睛：色潜级。 1.4.2. 1 25％乙腊一水溶液：将250 ml.的乙睛(1. 4. 2)与750 ml、的水混溶（使用前需要脱气）。 1.4.2.2 10％乙睛一水溶液：将100 mL的乙精(1.4.2)与900 mL的水混溶（使用前需要脱气）。 1.4.3 氮气。 1.4.4 二氯甲烷：加人0.5％-1.0％质量比（与三氯甲烷质量比）的乙醇进行稳定。 1.4.5 黄曲霉毒素M,标准溶液 1.4.5. 1 校准溶液 黄曲霉毒素M，三氯甲烷溶液标称浓度为10 fcg/mL。根据下面的方法，在最大吸收波段处测定溶 液的吸光度，以确定黄曲霉毒素M：的实际浓度。 用分光光度计（ (l. 5. 11)在340 nm^-370 nm处测定，扣除三氯甲烷的空白本底，读取标准溶液的吸 光度值。在接近360 nm 最大吸收波段弋。、处，测得吸光度值为A，根据式（1)计算出浓度值 c; (1 4g/ml,)。 ‘：；＝AXM X 100/E ·····，······························⋯⋯（1） 式中： A一一在k, }、处测得的吸光度值； M- 328 g/mol，黄曲霉毒素M：摩尔质量，单位为克每摩尔（g/mol ; E 1995,溶于三氯甲烷中的黄曲霉毒素M：的吸光系数，单位为平方米每摩尔（ml /mol) o 1.4.5.2 标准储备液 确定黄曲霉毒素M,标准溶液的实际浓度值后(1.4.5.1)，继续用三氯甲烷将其稀释至浓度为 0. 1 jug/ml的储备液。储备液密封后于冰箱中5℃以下避光保存。在此条件下，储备液可以稳定两个 月。两个月后，应该对储备液的稳定性进行核查。 1.4.5.3 黄曲霉毒素M：标准工作液 从冰箱中取出储备液（ ( l. 4.5.